Холестерин с серной кислотой
Содержание статьи
Медицинская биохимия, принципы измерительных технологий в биохимии, патохимия, диагностика, биохимия злокачественного роста. Часть 2.
Методы определения содержания холестерина сыворотки крови
фото Методы определения содержания холестерина сыворотки кровиМетоды определения общего холестерина подразделяются на:
1) колориметрические. Насчитывается около 150 колориметрических методов, основывающихся на реакциях образования цветных комплексов;
2) нефелометрические методы, основанные на сравнении степени мутности стандартного и исследуемого раствора;
3) титрометрические методы;
4) флюориметрические методы, позволяющие определять холестерин в микрообъемах сыворотки крови (например, в 0,01 мл ее);
5) газохроматографические и хроматографические методы;
6) гравиметрические методы.
Метод определения общего холестерина в сыворотке крови, основанный на реакции Либермана-Бурхарда (метод Илька)
Принцип метода
В сильнокислой безводной среде ХС взаимодействует со смесью серной, уксусной кислот и уксусного ангидрида. В ходе реакции ХС последовательно окисляется. При этом каждая стадия реакции сопровождается образованием молекулы ХС, которая имеет на одну двойную связь больше, чем соединение, из которого она образовалась.
В результате конечного окисления иона 3,5-холестодиена получается окрашенное соединение, растворенное в серной кислоте и дающее максимум абсорбции при 410 и 610 нм. Из-за неустойчивости окраски соединения время фотометрирования должно быть точно выдержано.
Реакционная смесь со стандартным раствором ХС имеет изумрудный цвет. Однако пробы сыворотки могут давать зеленый, голубой, бурый цвета. Это связано с тем, что в результате образования эндогенного тепла в реакцию вступают многие компоненты сыворотки крови. Кроме того, в реакции Либермана-Бурхарда свободный ХС и его эфиры образуют цветные комплексы с разным коэффициентом молекулярного поглощения. В случае высокого содержания эфиров ХС оптическая плотность оказывается более высокой. Поскольку на прямое определение ХС влияют многие факторы, реакцию ХС со смесью Либермана-Бурхарда нельзя считать специфичной.
Прямой метод определения ХС относительно прост в исполнении и недорог. Однако токсичность и способность вызывать коррозию системы в современных анализаторах ограничивают применение метода. В крупных лабораториях предпочтение отдают ферментативным методам определения ХС.
Референтные величины: холестерин 4,65-6,46 ммоль/л (180-250 мг/дл).
При концентрации холестерина в пробе выше 16 ммоль/л сыворотку разводят физиологическим раствором в соотношении 1 : 1 (результат).
Реакция чувствительна на изменение температуры, поэтому необходимо особенно соблюдать охлаждение реакционной смеси после добавки серной кислоты.
Билирубин в концентрации выше 50 мкмоль/л влияет на результат анализа.
Интерференцию билирубина можно исправить расчетом. Содержание 17 мкмоль/л билирубина приводит к завышению содержания холестерина в сыворотке примерно на 0,1 моль/л.
Сыворотка должна быть негемолизированной.
Необходимые реактивы
1. Ледяная уксусная кислота.
2. Концентрированная серная кислота.
3. Уксусный ангидрид.
4. Абсолютный этиловый спирт.
5. Кислотная смесь: в сухую колбу наливают 10 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл уксусного ангидрида, затем при постоянном перемешивании и охлаждении добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты. Смесь должна быть бесцветной или слегка желтоватой. Хранить в холодильнике в темной склянке с притертой пробкой.
6. Калибровочный раствор: 232 мг холестерина растворяют в 2-3 мл хлороформа и доводят до объема 100 мл абсолютным этиловым спиртом. Приготовленный раствор содержит холестерин в концентрации 6 ммоль/л.
Ход определения
К 2,1 мл кислотной смеси медленно по стенке пробирки добавляют 0,1 мл плазмы или сыворотки без признаков гемолиза, перемешивают встряхиванием и ставят на 20 мин в термостат или водяную баню при температуре 37 °С, затем фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против реактива при длине волны 625 нм.
Построение калибровочной кривой и расчет.
К 0,05-0,2 мл калибровочного раствора добавляют такое количество кислотной смеси, чтобы общий объем был 2,2 мл, перемешивают и выдерживают 20 мин при температуре 37 °С, так же как и опытные пробы, а затем фотометрируют. Окраска калибровочной пробы, в которую взято 0,05 мл калибровочного раствора, соответствует содержанию холестерина в плазме 3 ммоль/л, пробы, в которую взято 0,1 мл, — содержанию 6 ммоль/л и т.д.
Примечания
1. Попадание воды приводит к помутнению раствора.
2. Следы гемолиза или желтушность исследуемой плазмы или сыворотки служат причиной завышенных результатов.
3. Можно использовать для фотометрии и кюветы с длиной оптического пути 1 см, тогда количество кислотной смеси удваивают, а количество исследуемого материала остается прежним.
Метод определения содержания холестерина в сыворотке крови, основанный на холестеролоксидазной реакции
Принцип метода
Холестерин и его эфиры выделяются из липопротеинов детергентами. Холестеринэстераза гидролизует эфиры. В результате последующего ферментативного окисления холестерина холестериноксидазой образуется Н2О2.
Эфир холестерина + Н2О2 ↔ холестерин + жирные кислоты;
Холестерин + О2 ↔ холестен-3-ОН + Н2О2;
Н2О2 + n-хлорфенол + 4-аминоантипирин ↔ хинониминовый краситель + Н2О2.
Уровни нормы ХС, выявленные при обследовании «в целом здорового населения», относительно высоки. С точки зрения риска развития ишемической болезни сердца уровни ХС желательны:
1) рекомендуемый — менее 5,18 ммоль/л;
2) умеренный риск — 5,18-6,19 ммоль/л;
3) высокий риск — более 6,22 ммоль/л.
Клинико-диагностическое значение
Увеличение концентрации ХС наблюдается при полигенной гиперлипопротеидемии типа II А и II Б, III, гиперлипопротеидемии I, IV, V типов, вторичной, приобретенной гиперлипопротеидемии, отмечается также при заболеваниях печени, внутри- и внепеченочном холестазе, гломерулонефрите, нефротическом синдроме, ХПН, злокачественных опухолях поджелудочной железы, простаты, гипотиреозе, подагре, ИБС, беременности, диабете, алкоголизме, анальбуминемии, дисглобулинемии, острой перемежающейся порфирии.
Снижение концентрации холестерина обнаружено при дефиците α-липопротеида (болезнь Танжера), гипо- и а-β-липопротеидемии, некрозе печеночных клеток, злокачественных опухолях печени, гипертиреозе, нарушении всасывания, нарушении питания, мегалобластной анемии, сидеробластной анемии, талассемии, острых тяжелых заболеваниях, обширных ожогах, хронических обструктивных заболеваниях легких, умственной отсталости, ревматоидном артрите, лимфангиоэктазии кишечника.
Отмечены сезонные колебания уровня ХС, более высокие осенью и зимой, более низкие весной и летом. Повторное определение ХС после инфаркта миокарда необходимо проводить через три месяца.
Метод определения содержания липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови
Липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и низкой плотности (ЛПНП) в противоположность липопротеинам высокой плотности (ЛПВП) образуют нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. В надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения ЛПНП и ЛПОНП, остается α-холестерин или ЛПВП.
Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9-1,9 ммоль/л.
Принцип метода
Хиломикроны, ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности) и ЛПНП (липопротеины низкой плотности) осаждаются добавлением фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния.
После центрифугирования супернатант содержит ЛПВП (липопротеины высокой плотности) — фракцию, содержание холестерина в которой определяется ферментативно.
Полученные значения достоверны, если:
1) в пробе нет хиломикронов;
2) концентрация триацилглицеридов не превышает 400 мг/100 мл;
3) в пробах не обнаруживается следов III типа дислипопротеинемии.
При измерении на Hg 546 нм происходит завышение количества ЛПВП холестерина спектром поглощения гемоглобина, которое можно игнорировать при значениях до 200 мг Нb/100 мл.
Полученный при центрифугировании супернатант должен быть прозрачен. Если проба содержит большое количество триглицеридов (более 1000 мг/100 мл), осаждение липопротеинов может быть неполным (мутный супернатант) или часть осадка может плавать на поверхности. В этих случаях развести образец 1 : 1 0,9%-ным раствором NaCl и повторить осаждение.
Клинико-диагностическое значение ХС-ЛПВП
Эпидемиологические исследования показали обратную зависимость между уровнями ХС-ЛПВП и распространенностью ИБС. Определение ХС-ЛПВП способствует выявлению риска развития ИБС.
Повышению уровня ХС-ЛПВП способствуют такие заболевания, как первичный билиарный цирроз, хронический гепатит, алкоголизм, прочие хронические интоксикации.
Источник
Лабораторная работа №36 качественные реакции на холестерин
Холестеринотносится к стеринам, представляет собой вторичный циклический спирт. Большая часть холестерина в крови содержится в виде эфиров холестерина — холестеридов — сложных эфиров с кислотами, чаще всего с высшими жирными кислотами — пальмитиновой, стеариновой или олеиновой. Холестерин и его эфиры нерастворимы в воде, хорошо растворяются в органических растворителях: хлороформе, эфире, горячем спирте и др.
В крови холестерин образует комплексные соединения с белками. В мозге холестерин в норме содержится почти исключительно в свободном виде, а не в виде эфиров. В головном мозге происходит синтез холестерина.
Из холестерина в организме человека образуются соединения, обладающие высокой физиологической активностью: желчные кислоты и гормоны.
1. Реакция Либермана-Бурхарда.
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
Раствор холестерина в хлороформе дает с уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой красное окрашивание, переходящее затем в синие и зеленые тона.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) холестерин, 1 % хлороформный раствор; 2) уксусный ангидрид; 3) серная кислота, концентрированная; 4) сухое часовое стекло или чашка Петри; 5) пипетки.
ХОД РАБОТЫ:
На сухое стекло наносят 1 каплю хлороформного раствора холестерина, 1 каплю уксусного ангидрида и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Образуется красная, затем красно-фиолетовая окраска, которая со временем принимает другие оттенки — синий, зеленый.
РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:
2. Реакция Сальковского.
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
Под действием концентрированной серной кислоты происходит дегидратация холестерина, конденсация образовавшихся продуктов в виде непредельных углеводородов, соединяющихся с серной кислотой с образованием окрашенных продуктов.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) холестерин, 1 % хлороформный раствор; 2) серная кислота концентрированная; 3) сухое часовое стекло или чашка Петри; 4) пипетки.
ХОД РАБОТЫ:
На сухое стекло наносят 1 каплю хлороформного раствора холестерина и 1 каплю серной кислоты (концентрированной). Развивается окрашивание.
РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:
Контрольные вопросы:
Липиды: химическая структура, физико-химические свойства, значение.
Жирные кислоты, классификация, свойства и биологическое значение.
Классификация фосфолипидов. Химическая структура. Физико-химические свойства.
Классификация гликолипидов. Химическая структура. Физико-химические свойства.
Липопротеиды. Классификация. Свойства. Значение.
Холестерин. Химическая структура, биологическое значение.
Какие вещества образуются из холестерина в организме человека?
Тема 13
ОБМЕН ЛИПИДОВ
Лабораторная работа №37
ЭМУЛЬГИРОВАНИЕ ЖИРА
Жиры, чтобы подвергнуться действию липаз, должны быть предварительно эмульгированы. Желчные кислоты — поверхностно активные вещества, являющиеся основными эмульгаторами жира в пищеварительном тракте. Желчные кислоты поступают с желчью в двеннадцатиперстную кишку, обволакивают капельки жира и препятствуют их слиянию. Желчные кислоты — холевая, дезоксихолевая, кенодезоксихолевая и литохолевая — являются производными холановой кислоты.
Белки, мыла, соли угольной кислоты, содержащиеся в некотором количестве в двеннадцатиперстной кишке, также эмульгируют жиры.
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
Взбалтывая жир с водой, можно наблюдать образование расслаивающейся, нестойкой эмульсии. Добавляя поверхностно активные вещества, можно получить стойкую эмульсию. Эмульгаторы легко адсорбируются на поверхности раздела двух фаз, образуя тончайшую пленку, которая препятствует слиянию капелек эмульсии.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) растительное масло; 2) NaOH, 1 %; 3) мыло, 1 %; 4) Na2CO3, 1 %; 5) раствор яичного белка; 6) желчь; 7) пробирки.
ХОД РАБОТЫ:
В 5 пробирок наливают по 3 капли растительного масла. Добавляют в 1-ю пробирку 20 капель дистиллированной воды, во 2-ю — 20 капель желчи, в 3-ю — 20 капель 1 % раствора яичного белка, в 4-ю — 20 капель 1 % раствора мыла, в 5-ю — 20 капель 1 % раствора углекислого натрия. Все пробирки тщательно взбалтывают. Через 5 минут наблюдают сохранение эмульсии.
Результаты занести в таблицу 28, отметить сохранилась ли образовавшаяся эмульсия; если сохранилась, указать степень ее дисперсности.
Таблица 28
Мыло | Вода | Желчь | Белок | Сода |
Сохранение эмульсии Степень ее дисперсности |
ВЫВОД:
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник
Повышенный холестерин
Прежде чем разбираться с вопросом снижения холестерина, необходимо понимать, каким он бывает и каким путем попадает в кровь. И стоит ли его вообще снижать? Давайте разбираться.
Плохой или хороший холестерин ?
По природе холестерин является спиртом растворимым в жире. Причисление этого липопротеида к «плохому» или «хорошему» происходит на основании плотности и соответственно его способностью откладываться на стенках сосудов:
- «LDL»: с небольшой плотностью (ЛПНП) — плохой;
- «HDL»: с высокой плотностью (ЛПВП) — хороший.
Какой анализ сдать, чтобы узнать свой холестерин?
Холестерин — это жизненно важная составляющая крови, «строительный материал» для нашего тела. Поэтому слишком низкий холестерин тоже не есть хорошо. В идеале общий уровень холестерина в крови должен составлять от 3,1 до 5,2 ммоль/л. Но сам по себе показатель общего холестерина не информативен. И даже если вы увидели значение общего холестерина в своих анализах около 7,5 ммоль/л, не спешите умирать. Сдайте расширенные анализы.
Существует такой анализ, как липидограмма. В нем указываются значения всех липидов (жиров):
- значение общего холестерина;
- разбивка общего на «плохой» — это липопротеиды низкой плотности, и «хороший» — это липопротеиды высокой плотности;
- триглицериды;
- индекс атерогенности — этот показатель рассчитывается на основе плохого, хорошего холестерина и триглицеридов. Именно он показывает, насколько высока вероятность развития атеросклероза. Этот индекс должен быть от 2 до 3. То есть если у вас повышенный холестерин, но индекс меньше 3, то не стоит волноваться!
Указанная выше липидограмма — это отдельный анализ только на липипротеиды. Но можно сдать и расширенную биохимию. Только в этом случае проследить, чтобы в ней был липидный спектр. В платных лабораториях в расширенную биохимию, как правило, уже включена липидограмма.
Не важно, будете ли вы делать полный биохимический анализ крови или отдельно липидный спектр — кровь будут брать из вены. Сдать липидограмму отдельно будет дешевле, чем всю биохимию.
Итак, если результаты анализов превышают допустимые нормы, придется снижать холестерин.
Снижение холестерина
Реально действенным способом снижения холестерина во всем мире являются статины.
СТАТИНЫ
Эти лекарственные средства обладают гиполипидемическими свойствами и назначаются медиками. Препараты уменьшают продукцию жиров в том числе с низкой плотностью. Статины, также способны противостоять системному воспалению.
Эффект обусловлен снижением активности фермента в печени, участвующего в выработке составляющих холестерина. Речь идет о ферменте «HMG-CoA-редуктаза» и соответственно статины являются ингибиторами этого фермента.
Но их прием категорически противопоказан тем, кто еще собирается иметь детей. И вообще, прием статинов имеет ряд серьезных последствий для организма.
СТАТИНЫ ОСЛОЖНЕНИЯ
Область | Симптоматика |
ЖКТ | изжога, тошнота, диарея, метеоризмы, ксеростомия, изменение вкусовых ощущений и аппетита, боли в животе, внутрипеченочный холестаз, снижение печеночных функций, панкреатит |
Опорно двигательная система | воспалительные поражения и боли мышц, артралгические проявления |
Кроветворная система | гемолитические анемии, снижение лейкоцитов и тромбоцитов и прочие нарушения |
Глаза | затемнение хрусталиков, катаракта, нарушение функции зрительного нерва |
Нервная система | головокружение, головные боли, проблемы со сном, астенический синдром, судороги и пр. |
Кожные покровы | крапивная сыпь, отёк Квинке, зуд |
Специалисты выделяют и другие проявления: печеночная недостаточность, уменьшение либидо и потенции, стенокардию, болевые ощущения в груди.
Поэтому не спешите! Для начала попробуйте привести холестерин в норму без статинов.
Как снизить холестерин без статинов?
В первую очередь врачи рекомендуют начать с диеты. Но! Холестерин попадает в кровь не только с пищей. Он также вырабатывается в печени. Поэтому если печень устроена так, что вырабатывает больше холестерина, то питание слабо на это повлияет. Диета в этом случае позволит только не добавить еще больше холестерина к том, что уже выработался печенью. Именно поэтому некоторые говорят: «Ну, ничего жирного не ем, а холестерин зашкаливает? Как такое может быть?». Виновата печень. Но, в любом случае, стоит попробовать диету.
Ограничить количество жиров животного происхождения. Тут есть важный момент. Многие считают, что самым опасным «врагом» здесь является мясо. И просто не едят мясо. Это большая ошибка. Мы часто забываем, что жиры скрываются в молочных продуктах!
Много жиров человек употребляет именно с молоком, сыром, сметаной, маслом, творогом. Только представьте, в 100 г твердого желтого сыра содержится 50 г животного жира. Это очень много! Поэтому при невозможности отказаться от молочных продуктов, следует хотя бы выбирать таковые с наименьшим количеством жирности. Но только не обезжиренные. Желтый сыр вообще лучше не есть, следует заменить его на белый.
И еще более опасными продуктами, которые многие и не подозревают, являются те, где содержатся трансжиры. Это вся магазинная выпечка: торты, печенье, батоны, сладости, сушки и сухари. Да! Безобидные, на первый взгляд, сушки содержат огромное количество трансжиров, которые нас медленно убивают. Поэтому людям с высоким холестерином категорически запрещено употреблять всю магазинную выпечку.
Людям с проблемным холестерином обязательно следует употреблять омега-3. Есть продукты с высоким содержанием омега-3: лососевые рыбы, скумбрия, сельдь, оливковое и льняное масло.
Можно получать омега-3 из добавок. Они продаются в аптеках и в интернете. Выбор очень богатый и разобраться в добавках с первого раза затруднительно. Помогут в этом вопросе следующие подсказки при выборе средства:
- учитывайте содержание в составе именно omega-3 жирных кислот. Многие БАДы имеют в составе дополнительные ингредиенты;
- соотношение с другими классами жирных кислот омега 6 и 9;
- в расчет принимайте и сырье которое является источником ЖК. Оно может быть не только животного, но и растительного происхождения.
Процедура покупки намного удобнее в интернет-магазинах в сравнении со стационарными аптеками — можно не спеша ознакомиться с инструкциями и выбрать лучшую цену. К наиболее рекомендуемым и имеющим положительные отзывы покупателей, относятся препараты Солгар омега 3. Этот бренд из США имеет отличную репутацию и многолетнюю историю.
Таким образом, можно выбрать стратегию, часто рекомендуемую специалистами — меньше животных жиров + жирная рыба и растительное масло + омега-3.
После соблюдения такого правила в течение трех месяцев обязательно пересдайте анализ еще раз. С вероятностью 100% он будет лучше. А с вероятностью 50% холестерин впишется в норму.
Хотелось бы отметить еще один момент. Омега-3 снижает триглицериды и повышает «хороший» холестерин. Именно он не дает «плохому» навредить нашему организму. Поэтому хороший может повыситься, но это замечательно. Даже если хороший холестерин выше нормы — не страшно. Смотрите на индекс атерогенности. Если удалось привести его в норму — значит, вы двигаетесь в правильном направлении!
Приобрести добавки для вашего рациона содержащие Omega-3, вы можете на нашем сайте ТренерИзДома.рф. В каталоге большой выбор препаратов, все позиции имеют инструкции и описания. Купить омега 3 Солгар вы можете самостоятельно оформив заказ или по телефону. Мы гарантируем качество продукции и минимальные цены. Заказывайте Omega-3 с доставкой по Москве или в любой город РФ.
Источник