Количество гемоглобина методом сали

Содержание статьи

Определение количества гемоглобина по методу сали

Метод определения концентрации гемоглобина по Сали практически не используется в современных лабораториях. Он требует больших временных затрат и дает неточные результаты. Но метод Сали все еще эффективен в условиях ограниченного доступа к современной технике. Например, при отсутствии электроэнергии, расходных материалов или при поломке автоматического исследовательского оборудования.

Принцип проведения исследования

В основе метода Сали лежит простая реакция преобразования гемоглобина. Для этого в препарат крови добавляется определенное количество хлористоводородной кислоты. В результате в пробирке образуется вещество хлоргематин, коричневого цвета.

Определить содержание преобразованного гемоглобина можно по интенсивности окраса полученной смеси. Для этого раствор разбавляется дистиллированной водой, пока его оттенок не станет идентичным веществу в контрольной запаянной пробирке.

Важно!

Со временем содержимое контрольных препаратов выцветает. В результате может быть отклонение полученных данных от реальных показателей на 1-3%.

Гемометр Сали для определения уровня гемоглобина

Чтобы упростить проведение лабораторного анализа был разработан гемометр Сали, который включает:

штатив с 3 вертикальными гнездами;
2 запаянные пробирки со стандартными жидкостями;
открытую градуированную пробирку;
капилляр (0,2 мл);
пипетку для воды;
стеклянную палочку для перемешивания.

Методика проведения анализа

Для определения содержания гемоглобина в крови лаборант наливает в пробирку 0,1% раствор соляной кислоты до нижней круговой отметки. Затем из пальца пациента забирается 0,04 мл крови и добавляется под прозрачный кислотный слой. Содержимое перемешивается и отставляется на четверть часа. Это время необходимо, чтобы гемоглобин преобразовался в хлоргематин.

По истечении 15 минут лаборант сравнивает цвет с контрольной пробиркой. Если у пациента не наблюдается анемии 3 степени, то полученный раствор окажется темнее. Затем с помощью пипетки по каплям добавляется дистиллированная вода. Каждый раз раствор перемешивается стеклянной палочкой.

Как только цвет сравняется, остается посмотреть на уровень жидкости по нижнему мениску. Учитывая, что стандартная пробирка гемометра Сали градуирована в г/%, для получения стандартной величины в г/л необходимо результат умножить на 10.

Важно!

Нормой для женщин считается уровень гемоглобина в 120-140 г/л. У мужчин этот показатель выше и составляет 130-150 г/л. Детская норма сильно варьируется от возраста и составляет 180-240 г/л у младенцев до года и 110-140 г/л у вплоть до совершеннолетия.

Недостатки метода Сали

Этот способ определения количества гемоглобина в крови не получил распространения в странах СНГ. У него есть несколько серьезных недостатков:

Время. На изучение крови 1 пациента затрачивается не менее 20 минут. При этом использование автоматизированных систем позволяет получить результат за несколько секунд.
Субъективность. Хроматическая методика Сали тесно связана с индивидуальным восприятием цвета. Соответственно, результаты могут различаться даже у 1 лаборанта в зависимости от внешних факторов.
Точность. Стандартная погрешность метода — 3 г/л. При использовании старых образцов контрольных пробирок, высоком содержании билирубина в крови и при плохом освещении результат определения уровня гемоглобина может отличаться еще больше, вплоть до 30% от реальных показателей.

Определение содержания гемоглобина в крови по методу Сали

В крови содержится в среднем 14 г % гемоглобина, у женщин — 12 — 15, у мужчин — 13 -16 г % (соответственно 120- 150 и 130- 160 г/л). Определение количества гемоглобина имеет большое значение и является обязательным компонентом анализа крови. Гемоглобин определяется колориметрическими методами. В настоящее время метод Сали в клинике применяется редко, так как существуют более точные методы с помощью фотоэлектроколориметров. Гемометр Сали используют в учебных целях.

Метод Сали основан на превращении гемоглобина в хлорид гематина коричневого цвета при добавлении к крови хлористоводородной кислоты. Определение гемоглобина производят колориметрическим способом, основанным на следующем принципе: если исследуемый раствор путём разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворённых веществ в обоих растворах будет совпадать, а количества веществ будут соотноситься как их объёмы. Зная количество гемоглобина в стандартном растворе (16,7 г%, что принято за 100% гемоглобина), легко вычислить его содержание в исследуемом растворе в относительных процентах.

Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Две крайние запаяны и содержат раствор солянокислого гематина, средняя градуирована и открыта. Она предназначена для исследуемой крови. К прибору приложены капилляр (с меткой 20 мм3), стеклянная палочка и пипетка.

Цель работы: определить содержание гемоглобина в крови по методу Сали.

Оснащение: гемометр Сали, стерильный скарификатор, 0,1% раствор HCI, фильтровальная бумага, вата, спирт, эфир, йод, дистиллированная вода. Объект исследования — человек.

Проведение работы. В среднюю пробирку гемометра наливают раствор HCI до нижней кольцевой метки. Затем из пальца обычным способом набирают кровь в капилляр до метки, удаляя излишек с помощью фильтровальной бумаги. Выдувают кровь на дно средней пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают её соляной кислотой из верхнего слоя.

После этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по её дну, и оставляют стоять на 8-10 минут. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к раствору добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор пока цвет полученного раствора не будет одинаков с цветом стандартного (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой).

Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в граммах на 100 г исследуемой крови (при переводе в единицы СИ полученную цифру умножают на 10, получая величину гемоглобина в граммах на 1 л крови). Можно вычислить также относительное содержание гемоглобина в исследуемой крови.

Оформление протокола. Запишите, каково содержание гемоглобина в исследуемой крови. Вычислите относительное процентное содержание гемоглобина следующим образом. Допустим, количество гемоглобина в крови соответствует 14 делениям гемометра. Тогда по пропорции вычисляем относительное содержание гемоглобина в процентах. Сравните полученное значение с нормой.

16,7 г % — 100 %

14,0 г % — х

х =(100-14,0)/16,7

Источник

3) Определение количества гемоглобина в крови по способу сали

Определение содержания гемоглобина в крови производится колориметрическими способами, один из которых (гематиновый метод Сали) основан на образовании устойчивого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с соляной кислотой. Принцип колориметрического способа заключается в том, что если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотносится как их объемы. В стандартном растворе гемоглобина содержится 167 г/л.

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику определения гемоглобина и найти содержание гемоглобина в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: гемометр Сали, капилляр с меткой 0,02 мл, 0,1 н раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, свежая кровь, пипетка, стеклянная палочка, стерильная инъекционная игла, вата, спирт, йод, эфир, стерильный скарификатор. Объект исследования — человек.

Х о д р а б о т ы

В среднюю пробирку гемометра налить 0,1 н раствор соляной кислоты до нижней кольцевой метки. Из пальца обычным способом набрать в капилляр кровь без пузырьков до метки. Излишек крови можно удалить из капилляра прикладыванием ваты или фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Выдуть кровь на дно пробирки из капилляра так, чтобы верхний слой кислоты остался неокрашенным. Не вынимая капилляр, промыть его раствором соляной кислоты из верхнего слоя пробирки гемометра. После этого содержимое пробирки перемешать стеклянной палочкой и поставить в гемометр на 5-10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин

Затем к содержимому пробирки прибавить по каплям дистиллированную воду, каждый раз перемешивая раствор стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет полученного раствора не станет одинаковым с цветом стандартного раствора боковых ампул гемометра. Цифра, стоящая на уровне нижней границы мениска полученного раствора отражает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах (г%).

Перевод полученных данных в единицы системы СИ (в г/л) производят путем умножения измеренного количества гемоглобина в г% на 10. Зарисовать гемометр и капилляр.

В выводе сравнить с нормой полученное содержание гемоглобина в исследуемой крови.

4) Подсчет количества эритроцитов

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику и определить количество эритроцитов в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжер для эритроцитов, 3 % раствор хлорида натрия, покровные стекла, регулируемая пипетка, пробирки, стерильный скарификатор, вата, спирт, эфир, йод. Объект исследования — человек.

Х о д р а б о т ы

Необходимо перед началом работы рассмотреть счетную камеру под микроскопом, найти малые квадратики и большие квадраты сетки (рис.1). Камеру предварительно необходимо подготовить путем притирания покровного стеклышка к боковым выступающим граням камеры до появления цветных (ньютоновских) колец. В каплю свежей крови, полученной из пальца, погрузить кончик меланжера (с красной бусинкой в расширении) для эритроцитов и набрать кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не

попали пузырьки воздуха. Быстро, пока кровь не свернулась, перенести кончик меланжера в 3 % раствор хлорида натрия и набрать его до метки 101, т.е. развести кровь в 200 раз. После этого взять заполненный меланжер (смеситель), зажать его концы 1 и 3 пальцами и в течение 1 мин встряхи-

вать. После тщательного перемешивания крови, удалив предварительно 1-2 капли, нанести небольшую капельку на сетку камеры.

При необходимости такое же разведение может быть выполнено другим способом. Например, 0,02 мл крови смешать с 4 мл 3 % NaCl в пробирке. Содержимое пробирки в этом случае тщательно перемешивается.

Если капля разведенной крови будет слишком велика, то жидкость может попасть на боковые грани камеры и высота слоя над сеткой будет больше 0,1 мм. В этом случае камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Разведенную (в меланжере) кровь следует еще раз перемешать.

Заполнив камеру, поместить ее под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступить к подсчету. Считать эритроциты удобнее при большом увеличении.

Необходимо подсчитать число эритроцитов в 5 больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например, по диагонали. Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратиками, руководствоваться правилом Егорова, согласно которому, относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе для данного квадратика не учитываются.

Формула для вычисления количества эритроцитов в 1 мм3 крови:

А х 4000 х 200

N = ———, где:

N — искомое число эритроцитов;

А — число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках (или в 5 больших);

4000 — множитель для получения содержания эритроцитов в одном мм3 крови;

200 — степень разведения эритроцитов.

Для перевода полученного количества эритроцитов в единицы СИ, подсчитанное количество эритроцитов умножить на 106 и выразить в N х 1012 /л (тера на литр). Зарисовать фрагмент сетки камеры Горяева с маленькими и большими квадратами.

В выводе сравнить количество подсчитанных эритроцитов с нормой.

Соседние файлы в предмете Нормальная физиология

Источник

3) Определение количества гемоглобина в крови по способу сали

Х о д р а б о т ы

В выводе сравнить с нормой полученное содержание гемоглобина в исследуемой крови.

4) Подсчет количества эритроцитов

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику и определить количество эритроцитов в исследуемой крови.

Х о д р а б о т ы

Формула для вычисления количества эритроцитов в 1 мм3 крови:

А х 4000 х 200

N = ———, где:

N — искомое число эритроцитов;

А — число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках (или в 5 больших);

4000 — множитель для получения содержания эритроцитов в одном мм3 крови;

200 — степень разведения эритроцитов.

В выводе сравнить количество подсчитанных эритроцитов с нормой.

Соседние файлы в папке Практика

Источник