Реакция либермана на холестерин

ХИМИЯ ЛИПИДОВ

Обнаружение липидов

Качественные реакции на липиды дают возможность ознакомиться с некоторыми представителями этих соединений и их свойствами.

Реакция №1 « Акролеиновая проба (обнаружение глицеринсодержащих липидов)»

Принцип: в основе реакции лежит способность глицерина при нагревании терять воду и превращаться в акролеин – ненасыщенный альдегид с резким специфическим запахом.

С помощью этой реакции обнаруживают глицерин, входящий в состав нейтральных жиров и фосфолипидов.

Реакция №2 «Обнаружение лецитина в желтке куриного яйца»

Принцип: лецитины, относящиеся к группе фосфолипидов, не растворяются в воде и ацетоне, но хорошо растворяются в спирте, эфире, хлороформе.

Реакция №3 «Обнаружение холестерина»

Холестерин относится к стеринам и по химической природе представляет собой циклический ненасыщенный вторичный спирт. Холестерин может образовывать эфиры с высшими жирными кислотами.

Принцип: В основе реакций для обнаружения холестерина лежит способность образовывать окрашенные соединения в присутствии серной кислоты и уксусного ангидрида. Этой реакцией пользуются для количественного определения холестерина в крови.

Реактивы: 1) холестерин, 1% хлороформный раствор; 2) серная кислота, концентрированная; 3) уксусный ангидрид.

1. Реакция Сальковского.

Ход определения: в сухую пробирку вносят 10 капель раствора холестерина и осторожно по стенке пробирки наслаивают 0,5 мл серной кислоты. На границе жидкостей появляется красное кольцо.

2. Реакция Либермана-Бурхардта.

Ход определения: в сухую пробирку вносят 10 капель раствора холестерина, 5 капель уксусного ангидрида и 2 капли серной кислоты. Постепенно появляется сине-зелёное окрашивание.

Реакция №4 «Эмульгирование жира»

Для того, чтобы подвергнуться расщеплению под действием ферментов в ЖКТ жиры предварительно должны эмульгироваться. Эмульсия представляет собой дисперсную систему, состоящую из множества мелких капелек нерастворимой жидкости, например – жира, равномерно распределенных в жидкой фазе. Основными эмульгаторами жира в пищеварительном тракте являются желчные кислоты, а также белки, мыла и соли угольной кислоты, содержащиеся в некотором количестве в двенадцатиперстной кишке.

Принцип: взбалтывая жир с водой, можно наблюдать образование расслаивающейся, нестойкой эмульсии. Добавляя поверхностно-активные вещества, можно получить стойкую эмульсию. Эмульгаторы легко адсорбируются на поверхности раздела двух фаз, образуя тончайшую пленку, которая препятствует слиянию капелек эмульсии.

Реактивы: 1) растительное масло; 2) дистиллированная вода; 3) мыло, 1% раствор; 4) желчь; 5) яичный белок, 1% раствор; 6) карбонат натрия (сода), 1% раствор.

Ход определения: в 5 пробирок (предварительно пронумерованных) наливают по 3 капли растительного масла. В 1-ю пробирку добавляют 20 капель дистиллированной воды; во 2-ю пробирку – 20 капель желчи; в 3-ю – 20 капель мыла; в 4-ю – 20 капель яичного белка; в 5-ю – раствор карбоната натрия. Все пробирки предварительно взбалтывают. Через 5 минут оценивают сохранение эмульсии.

Указания к составлению отчета: результаты опыта занесите в таблицу, отмечая, образование эмульсии, её сохранность и степень дисперсности.

«Определение β-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом»

Принцип: в присутствии хлористого кальция (CaCl2) и гепарина нарушается коллоидная устойчивость белков сыворотки крови, в связи с чем β-липопротеины выпадают в осадок. Гепарин образует с липопротеинами комплекс, который под действием хлористого кальция выпадает в осадок. По степени мутности судят о концентрации β-липопротеинов в сыворотке.

Реактивы: 1) хлористый кальций: 0,025 М раствор (безводный СаCl2 растворяют в дистиллированной воде или 28 мл ампульного хлорида кальция доводят в мерной колбе до 500 мл; реактив храниться в холодильнике); 2) гепарин в концентрации 1000 Ед/мл (аптечный гепарин концентрацией 5000 Ед/мл разводят дистиллированной водой: 1 мл гепарина и 4 мл воды).

Ход определения: В химическую пробирку наливают 2 мл хлористого кальция и добавляют 0,2 мл сыворотки, перемешивают. Вносят смесь в кювету (5 мм) ФЭКа, измеряют исходную оптическую плотность (Е1) против раствора хлористого кальция, длина волны 630-690 нм. Содержимое переносят обратно в пробирку. В эту же пробирку вносят 0,04 мл разведенного гепарина. Ровно через 4 минуты фотометрируют пробу против хлористого кальция (Е2).

Расчёт: содержание β-липопротеинов в сыворотки крови выражают в мг% или г/л.

(Е2 – Е1) х 1165 = мг% или (Е2 – Е1) х 11,65 = г/л

Норма: 250 – 600 мг% или 2,5 – 6,0 г/л

Общие липиды.

Липиды – это группа органических веществ, характеризующиеся нерастворимостью в воде (гидрофобностью), растворимостью в органических растворителях.

Группу «общих липидов» (ОЛ) плазмы составляют нейтральные жиры (ТГ), фосфолипиды, холестерин (ХС), эфиры ХС, гликолипиды, свободные жирные кислоты (СЖК).

Для количественного определения содержания ОЛ в сыворотке (плазме) крови применяют несколько групп методов, среди которых можно назвать гравиметрические, окислительные, турбидиметрические, методы, основанные на цветной реакции, развивающейся при взаимодействии продуктов распада ненасыщенных липидов с сульфофосфорновольфрамовым реактивом. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию ОЛ в сыворотке крови.

Определение концентрации общих липидов в сыворотки крови.

Принцип метода: ненасыщенные липиды и жирные кислоты, фосфолипиды и холестерин взаимодействуют после гидролиза серной кислоты с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания.

Реактивы:

1. раствор ванилина (ванилин + ортофосфорная кислота)
2. стандартный раствор (8 г/л)
3. концентрированная серная кислота

Проведение анализа:

1. • Длина волны 510 – 550 нм
   • Кювета 1 см
   • Температура с +15 до +25 0С

Расчет: Соп = Еоп/Ест х Сст, где Соп – концентрация пробы, Сст – концентрация стандарта.

Норма: концентрация ОЛ составляет 4 – 8 г/л.

Примечание: отбор проб для определения общих липидов должны производиться минимально через 14 ч после последнего приема пищи.

Клинико-диагностическое значение:

Ø Гиполипидемия (гиполипемия) – уменьшение концентрации общих липидов в сыворотке (плазме) крови.

-Голодание;

— Нарушение переваривании и всасывания жиров;

— Гипертиреоз.

Ø Гиперлипидемия (гиперлипемия) — увеличение концентрации общих липидов сыворотке (плазмы) крови.

— Физиологическая: после еды (может наблюдаться через 1 – 4 часа после приема пищи); беременность, прием алкоголя.

— Патологическая:

— первичная (наследственная)

— вторичная: ожирение, цирроз печени, сахарный диабет, нефротический синдром, острый и хронический панкреатит.

Липурия – появление липидов в моче.

Холестерин это один из жиров, соединение вырабатывается печенью и имеет очень важное значение для правильного функционирования всех органов и организма в целом.

Каждая клетка нашего тела содержит в наружной мембране часть холестерина.

У животных это соединение представлено как воскообразный стероид, который транспортируется кровью. Холестерин относится к спиртам. По химической номенклатуре называется холестерол. Использовать можно оба эти названия.

Это вещество выполняет ряд функций:

• покрывает нервные волокна;
• участвует в процессе метаболизма жирорастворимых витаминов;
• принимает участие в выработке витамина Д в кожном покрове под воздействием солнечного света;
• активный компонент в процессе синтеза половых гормонов;
• участвует в производстве кортизола, альдостерона.

Для человеческого организма, нормальный уровень выработки холестерина имеет показатель от 3,5 ммоль на литр до 7,7 ммоль на литр. Хотя, если прислушиваться к рекомендациям специалистов из Великобритании, то показатель выше 6 моль на литр считается уже завышенным. При таком показателе увеличивается риск возникновения атеросклеротической патологии. Практически все врачи классифицируют показатели — миллиграмм/децилитр или миллимоль/литр, поэтому общепринятые значения могут отличаться:

1. в норме содержание меньше 200 мг/дл;
2. выше нормы — до 239 мг/дл;
3. высокий показатель — 240 мг/дл;
4. подходящий уровень — от 5 до 6,3 ммоль/л;
5. незначительно завышен — от 6,4 ммоль/л;
6. допустимый, но высокий — от 6,5 до 7,7 ммоль/л;
7. завышенный уровень — выше 7,9 ммоль/л.

Рекомендованный уровень холестерина в сыворотке крови человека, должен составлять плотность 5 ммоль на литр.

Методы определения содержания холестерина

Современная медицина на сегодняшний день разработала много методов определения холестерина в крови.

Для одной из диагностических проверок, достаточно всего лишь обратиться ближайшую больницу.

Если присутствует в организме высокий уровень, это может привести к плохим последствиям.

В таком случае заниматься самолечением категорически запрещено.

Методики и принцип определения:

• Гравиметрический;
• Титриметрический;
• Флуориметреческий метод способен измерять холестерин при малейшем объеме сыворотки крови;
• Газохроматографический и хроматографический;
• Колориметрический метод;
• Тонкослойная хроматография;
• Газожидкостная хроматография;
• Полярографический метод способен точно определить общий холестерин в сыворотке крови, а также свободный;
• Ферментативный метод. Протекает по определенному алгоритму.
• Спектрофотометрический — зависит от содержания холестерола.

Существует также поляриметрический метод. Этот метод основан на проведении нескольких цветных реакций.

Первая реакция это Биоля-Крофта. Для неё используются уксусную кислоту и серную, при наличии холестерина раствор приобретает красный цвет.

Вторая реакция — это Ригли. Реакция заключается во взаимодействии холестерина с раствором, содержащим метанол и серную кислоту.

Третья реакция – Чугаева, основана на взаимодействии холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.

При наличии холестерина раствор приобретает красную окраску. Следующая реакция Либермана-Бурхарда. В ходе реакции происходит окисление холестерина в кислой среде, не содержащей воды.

В результате образуются сопряженные двойные связи. В результате появляется комплексное соединение изумрудно-зеленого цвета. Эта реакция отличается от остальных тем, что не имеет постоянного окрашивания. В медлитературе встречается разное соотношение компонентов реакции.

Последний Метод это реакция Калиани-Златкмса-Зака.

Заболевания при высоком уровне холестерина в крови

Высокий уровень холестерина может привести к различным заболеваниям.

Врачи рекомендуют сдавать общий анализ крови на концентрацию холестерина каждый год.

Такой подход позволяет выявить большое количество патологий на ранних стадиях развития.

При наличии отклонений от нормы в содержании ЛПВП и ЛПНП в организме возможно возникновение ряда заболеваний, таких как:

1. стенокардия;
2. инсульт;
3. инфаркт миокарда;
4. расстройства в работе сосудистой системы;
5. атеросклероз и другие патологии.

Стенокардия — это болезнь, которая характеризуется острой болью, дискомфортными ощущениями в грудной клетке. Данные симптомы спровоцированы тем сердечная мышца не получает необходимое количество кислорода и питательных веществ для нормальной работы.

Микроинсульт, инсульт. Возникает вследствие образования в крови сгустка, способного блокировать кровеносный сосуд, расположенный в головном мозге.

В результате происходит нарушение кровообращения, приводящее к постепенному отмиранию клеток определенного участка головного мозга.

Инфаркт миокарда это патология, формирующаяся при блокировке доступа крови к клеткам сердечной мышцы, в результате чего возникает кислородное голодание. Чаще всего это спровоцировано образованием тромба, расположенного в просвете коронарных артерий. Это может привести к частичной гибели сердечной мышцы.

Атеросклероз. Данная патология бывает нескольких типов.

Выделяют атеросклероз нижних конечностей, сосудов сердца, печени, почек, желудка и других органов. Возникает в результате образования атеросклеротических бляшек, которые расположены в сосудах кровеносной системы. Они затрудняют или полностью перекрывают кровоток, что приводит к нарушению кровообращения. Прогрессирование заболевания может спровоцировать наступление летального исхода.

Причины и симптомы повышенного холестерина

Существует множеств разных симптомов, по которым можно самостоятельно выявить наличие повышенного холестерина в крови.

Опытный специалист определяет это без исследования. Легче всего определить наличие повышенного уровня по присутствию в организме характерных нарушений в работе.

Для повышенного холестерина характерно наличие у больного следующих симптомов:

• Появление желтых пятен на кожных покровах, особенно вокруг глаз. Данный симптом имеет медицинское название — ксантома. Чаще всего это может передаваться наследственным путем.
• Появление болевых ощущений возникающих в конечностях при оказании на организм физической нагрузки. Симптом развивается в результате сужения артериальных сосудов снабжающих кровью конечности.
• Наличие стенокардии, возникающей в результате сужения коронарных артерии сердца.
• Образование мини инсульта, в результате формирования сгустков крови и разрыва сосуда.
• Развитие сердечной недостаточности, в результате недостатка в кислороде и питательных веществ.

Все причины, по которым может быть повышен холестерин в крови, разделяют на два вида изменяемые и неизменяемые.

Основным фактором, оказывающим влияние на повышение уровня холестерина в крови, является неправильное питание и неправильный образ жизни. Помимо этого на этот показатель может оказывать влияние состояние окружающей среды.

К неизменяемым факторам относятся возраст и генетическая предрасположенность в возникновении повышенной концентрации холестерина.

Основными причинами повышения холестерина являются:

1. Вредные привычки. Курение является одной из основных причин возникновения патологии. Потребление алкогольных напитков может привести к алкогольной зависимости, как правило, все алкоголики имеют высокий уровень ЛПНП, а уровень ЛПВП — понижен.
2. Лишний вес. Группа людей, которые страдают от лишних килограммов или ожирения обладают высоким уровнем ЛПНП. Это наблюдается чаще, чем у людей с нормальным весом.
3. Неподвижный образ жизни. Для сохранения нормального уровня холестерина, нужно ежедневно делать утреннюю зарядку на протяжении 20 минут. По возможности рекомендуется ходить в спортзал на занятия с тренером, заниматься аквааэробикой, ездить на велосипеде минимум раз в неделю. У кого нет такой возможности, могут заниматься быстрой ходьбой ежедневно на протяжении 1 часа. Не рекомендуется вести малоподвижный образ жизни.

Помимо этого к основным причинам относится неправильное питание. Некоторые продукты содержат повышенное количество холестерина. Например, яйца, почки. Чтобы избежать повышенного показателя, следует придерживаться правильного питания. Рекомендуется рассчитывать количество калорий на каждый день с учетом энергетической и пищевой ценности продуктов.

Факты о холестерине рассмотрены в видео в этой статье.